Hygienisch-mikrobiologische Wasseruntersuchung in der Praxis	3
	Inhaltsverzeichnis	7
	Geleitwort	17
	Autorenverzeichnis	19
	1 Allgemeines	21
	2 Methodische Grundlagen	25
	2.1 Reinigen und Sterilisieren der Labormaterialien	25
	2.1.1 Reinigung	26
	2.1.2 Heißluftsterilisation	26
	2.1.3 Lagerung von sterilen Labormaterialien	27
	2.2 Herstellung und Aufbewahrung von Nährböden	27
	2.2.1 Fertignährböden	28
	2.2.2 Zubereitung	28
	2.2.3 Sterilisation	29
	2.2.4 Lagerung der gebrauchsfertigen Nährböden	29
	2.2.5 Konfektionierung	30
	2.3 Entsorgung	30
	Literatur zu Kapitel 2 bis 2.3	31
	2.4 Entnahme und Transport von Proben	32
	2.4.1 Allgemeines	32
	2.4.2 Probenahmegefäße und Zubehör	33
	2.4.3 Probenahmebegleitschein	33
	2.4.4 Entnahme von Trinkwasser	34
	2.4.5 Entnahme von sonstigen Wasserproben	37
	2.4.6 Probentransport	38
	Literatur	39
	2.5 Mikrobiologisches Messen	39
	2.5.1 Einführung	39
	2.5.2 Modellierung des Messfehlers	40
	2.5.3 Gussplattenverfahren	43
	2.5.4 Membranfilterverfahren	44
	2.5.5 Most Probable Number-Methode (MPN-Verfahren)	46
	2.5.6 Titer-Methode	50
	Literatur	50
	2.6 Vergleichbarkeit mikrobiologischer Messmethoden	50
	Literatur	52
	2.7 Nationale/internationale Normung	52
	2.7.1 Nationale Normung	52
	2.7.2 Internationale Normung	53
	Literatur	57
	3 Qualitätssicherung	59
	Literatur	61
	3.1 Laborakkreditierung	61
	3.1.1 Ablauf der Akkreditierung	67
	3.1.1.1 Antragsverfahren	68
	3.1.1.2 Begutachtungsverfahren	69
	3.1.1.3 Akkreditierung	69
	3.1.1.4 Überwachungsverfahren	70
	3.1.2 Anforderungen nach ISO/IEC 17025	70
	3.1.3 Schwerpunkte der Begutachtung	74
	3.1.3.1 Interne Audits und Managementbewertungen	74
	3.1.3.2 Zuverlässiger Umgang mit Referenzstämmen	74
	3.1.3.3 Methodenvalidierung	75
	3.1.3.4 Eignungsprüfung	76
	3.1.3.5 Probenahme	76
	3.1.3.6 Unparteilichkeit	77
	3.1.3.7 Unterauftrag	78
	3.1.4 Hinweis	78
	3.2 Mikrobiologische Ringversuche zur externen Qualitätskontrolle im Rahmen der Trinkwasserverordnung 2001	79
	3.2.1 Einleitung	79
	3.2.2 Qualität der Präparation im Vergleich	81
	3.2.3 Präparation der Proben, Versendung, Auswertung	83
	3.2.4 Ergebnisse der teilnehmenden Labore	84
	3.2.5 Probleme	85
	3.2.6 Coliforme Bakterien und E. coli	85
	3.2.7 Clostridium perfringens	87
	3.2.8 Legionella	89
	3.2.9 Diskussion	90
	3.2.10 Ringversuche und Messunsicherheit	91
	3.2.11 Bottom-up-Ansatz (Beispiel: Nachweis von Legionella)	92
	3.2.12 Top-down Ansatz – Messunsicherheit nach VAM	94
	3.2.13 Messunsicherheit nach EUROLAB	95
	3.2.14 Folgerungen	96
	Literatur	97
	4 Bakteriologische Wasseruntersuchung	99
	4.1 Koloniezahl	99
	4.1.1 Begriffsbestimmung	99
	4.1.2 Anwendungsbereich	99
	4.1.3 Nährböden	101
	4.1.3.1 Nähragar	102
	4.1.3.2 Hefeextraktagar (nach DIN EN ISO 6222, 1999)	102
	4.1.4 Untersuchungsgang	102
	4.1.5 Störungsquellen	103
	4.1.6 Auswertung	104
	4.1.7 Angabe der Ergebnisse	104
	Literatur	105
	4.2 E. coli-coliforme Bakterien (einschließlich pathogener Varianten)	105
	4.2.1 Begriffsbestimmung	105
	4.2.2 Anwendungsbereich	107
	4.2.3 Nährböden und Reagenzien	108
	4.2.3.1 Nährböden und Reagenzien für Trinkwasser	108
	4.2.3.2 Nährböden und Reagenzien zur Untersuchung von Mineral-, Quell- und Tafelwasser	110
	4.2.3.3 Nährböden und Reagenzien für Schwimmbeckenwasser	112
	4.2.3.4 Nährböden und Reagenzien für Oberflächenwasser	113
	4.2.3.5 Nährböden und Reagenzien für sonstige Untersuchungen	113
	4.2.4 Untersuchungsgang	113
	4.2.4.1 Untersuchung von Trinkwasser nach TrinkwV 2001 mit dem Referenzverfahren mit Lactose-TTC-Agar durch Membranfiltration (nach DIN EN ISO 9308-1, 2001)	113
	4.2.4.2 Untersuchung von Trinkwasser (TrinkwV 2001) mit dem anerkannten Alternativverfahren Colilert(®)-18/Quanti-Tray(®) mittels MPN-Flüssiganreicherung	119
	4.2.4.3 Untersuchung von Mineral-, Quell- und Tafelwasser	123
	4.2.4.4 Untersuchung von Schwimmbeckenwasser (nach DIN 19643, 1997)	126
	4.2.4.5 Untersuchung von Badegewässern auf E. coli nach der EG-Richtlinie 2006/7/EG	126
	4.2.4.6 Untersuchung von Oberflächengewässern auf Coliforme	128
	4.2.4.7 Weitere Untersuchungsverfahren	129
	4.2.4.8 Untersuchung sonstiger Proben	132
	4.2.5 Störungsquellen	132
	4.2.6 Auswertung	133
	4.2.7 Angabe der Ergebnisse	133
	4.2.8 Künftige Methoden	134
	Literatur	134
	4.3 Weitere Enterobakterien	136
	4.3.1 Salmonellen	136
	4.3.1.1 Begriffsbestimmung	136
	4.3.1.2 Anwendungsbereich	137
	4.3.1.3 Nährmedien und Reagenzien	137
	4.3.1.4 Untersuchungsgang	143
	4.3.1.5 Weitere Methoden	149
	4.3.1.6 Störungsquellen	149
	4.3.1.7 Auswertung	149
	4.3.1.8 Angabe der Ergebnisse	150
	Literatur	151
	4.3.2 Yersinia	152
	4.3.2.1 Begriffsbestimmung	152
	4.3.2.2 Anwendungsbereich	152
	4.3.2.3 Nährböden und Reagenzien	153
	4.3.2.4 Untersuchungsgang	156
	4.3.2.5 Störungsquellen	159
	4.3.2.6 Auswertung	160
	4.3.2.7 Angabe der Ergebnisse	160
	Literatur	161
	4.4 Enterokokken	162
	4.4.1 Begriffsbestimmung	162
	4.4.2 Anwendungsbereich	162
	4.4.3 Nährböden	163
	4.4.4 Untersuchungsgang	166
	4.4.4.1 Nachweisverfahren nach Mineral- und Tafelwasserverordnung	167
	4.4.4.2 Membranfiltration (Untersuchung von Trinkwasser)	169
	4.4.5 Störungsquellen	173
	4.4.6 Auswertung	174
	4.4.7 Angabe der Ergebnisse	174
	Literatur	175
	4.5 Clostridien	176
	4.5.1 Begriffsbestimmung	176
	4.5.2 Anwendungsbereich	176
	4.5.3 Nährmedien und Reagenzien	178
	4.5.4 Nachweismethode	181
	4.5.4.1 Nachweisverfahren für sulfitreduzierende sporenbildende Anaerobier: Flüssigkeitsanreicherung und Membranfiltration	181
	4.5.4.2 Nachweisverfahren für C. perfringens nach Trinkwasserverordnung 2001 (m-CP-Agar)	184
	Literatur	187
	4.6 Pseudomonas aeruginosa	188
	4.6.1 Begriffsbestimmung	188
	4.6.2 Anwendungsbereich	190
	4.6.3 Nachweisverfahren nach DIN EN 12780 (2002)	191
	4.6.3.1 Grundlagen	191
	4.6.3.2 Nährmedien und Reagenzien	192
	4.6.3.3 Untersuchungsgang	194
	4.6.3.4 Zählung	196
	4.6.3.5 Angabe der Ergebnisse und Untersuchungsbericht	196
	4.6.4 Nachweisverfahren nach Mineral- und Tafelwasserverordnung	197
	4.6.4.1 Grundlagen	197
	4.6.4.2 Nährböden und Reagenzien	198
	4.6.4.3 Untersuchungsgang	199
	4.6.5 Störungsquellen, zusätzliche Hinweise	199
	Literatur	201
	4.7 Aeromonas	202
	4.7.1 Begriffsbestimmung	202
	4.7.2 Anwendungsbereich	202
	4.7.3 Nährböden und Reagenzien	203
	4.7.4 Untersuchungsgang	205
	4.7.4.1 Flüssigkeitsanreicherungsverfahren	205
	4.7.4.2 Membranfiltrationsverfahren	207
	4.7.5 Störungsquellen	207
	4.7.6 Auswertung	208
	4.7.7 Angabe der Ergebnisse	209
	Literatur	209
	4.8 Campylobacter	210
	4.8.1 Begriffsbestimmung	210
	4.8.2 Anwendungsbereich	211
	4.8.3 Nährmedien und Reagenzien	212
	4.8.4 Untersuchungsgang	215
	4.8.5 Störungsquellen	220
	4.8.6 Auswertung und Angabe der Ergebnisse	220
	Literatur	222
	4.9 Legionellen	223
	4.9.1 Begriffsbestimmung	223
	4.9.2 Anwendungsbereich	223
	4.9.3 Nährböden und Reagenzien	225
	4.9.4 Untersuchungsgang	226
	4.9.4.1 Probenahme	228
	4.9.4.2 Direktausstrich	230
	4.9.4.3 Membranfiltrationsverfahren	231
	4.9.4.4 Inkubation und Auswertung	231
	4.9.4.5 Zentrifugationsverfahren	232
	4.9.5 Störungsquellen	232
	4.9.6 Auswertung und Angabe der Ergebnisse	233
	Literatur	233
	4.10 Atypische Mykobakterien	234
	4.10.1 Begriffsbestimmung	234
	4.10.2 Anwendungsbereich	235
	4.10.3 Nährböden und Reagenzien	235
	4.10.3.1 Reagenzien für die Dekontamination	235
	4.10.3.2 Löwenstein-Jensen-Medium (LJ)	235
	4.10.3.3 Middlebrook-7H10-Agar mit OADC-Anreicherung und Glycerin (7H10)	236
	4.10.3.4 Reagenzien für die Ziehl-Neelsen-Färbung	236
	4.10.4 Untersuchungsgang	236
	4.10.4.1 Dekontamination des Probenmaterials	237
	4.10.4.2 Anreicherung des Probenmaterials durch Filtration	238
	4.10.4.3 Kulturelle Anzüchtung	240
	4.10.4.4 Abgrenzung von anderen Bakteriengattungen und Differenzierung	241
	4.10.5 Störungsquellen	242
	4.10.6 Auswertung	243
	4.10.7 Angabe der Ergebnisse	243
	Literatur	243
	4.11 Nachweis von Vibrio cholerae, Vibrio vulnificus und anderen Vibrio-Arten	244
	4.11.1 Begriffsbestimmung	244
	4.11.2 Anwendungsbereich	245
	4.11.3 Geräte, Nährmedien und Reagenzien	245
	4.11.3.1 Benötigte Geräte	245
	4.11.3.2 Nährböden und Reagenzien	245
	4.11.3.3 Weitere Medien	246
	4.11.4 Untersuchungsgang	246
	4.11.4.1 Probenansatz zum Nachweis von V. cholerae	247
	4.11.4.2 Probenansatz zum Nachweis von V. vulnificus	247
	4.11.5 Auswertung	249
	4.11.6 Differenzierung	250
	4.11.6.1 Nachweis von V. cholerae	250
	4.11.6.2 Nachweis von V. vulnificus	250
	4.11.6.3 Biochemische Reaktionen	252
	4.11.7 Angabe der Ergebnisse	252
	4.11.8 Qualitätssicherung	252
	Literatur	252
	5 Virologische und protozoologische Wasseruntersuchungen	253
	5.1 Bakteriophagen	253
	5.1.1 Begriffsbestimmung	253
	5.1.2 Anwendungsbereich	253
	5.1.3 Nährmedien und Reagenzien	255
	5.1.3.1 Medien für den Nachweis von FRNA-Phagen	256
	5.1.3.2 Medien für den Nachweis somatischer Coliphagen	257
	5.1.4 Untersuchungsgang	258
	5.1.4.1 Nachweis von FRNA-Bakteriophagen	259
	5.1.4.2 Nachweis von somatischen Coliphagen	261
	5.1.4.3 Proben mit sehr geringen Phagenzahlen	262
	5.1.5 Störungsquellen	263
	5.1.6 Auswertung und Angabe der Ergebnisse	264
	Literatur	264
	5.2 Enterale oder enteropathogene Viren	266
	5.2.1 Begriffsbestimmung	266
	5.2.2 Anwendungsbereich	267
	5.2.2.1 Viruskonzentrationen im Abwasser	267
	5.2.3 Anreicherung von Viren aus Wasserproben	268
	5.2.3.1 Filtration durch elektropositive Filter (Virosorb-1 MDS)	269
	5.2.3.2 Filtration über Glaswolle-gepackte Säulen	270
	5.2.4 Quantifizierungsmethoden auf Zellkultur	273
	5.2.4.1 Plaque-Forming-Units (PFU)-Test für den direkten Nachweis von Enteroviren oder anderen enteropathogenen Viren auf Zell-Monolayern	275
	5.2.4.2 Quantifizierung nach dem Most-Probable-Number (MPN) Verfahren	277
	5.2.4.3 Quantifizierung nach Tissue Culture Infective Dose 50 (TCID(50))	278
	5.2.5 Molekularbiologische Nachweisverfahren	278
	5.2.5.1 Nukleinsäure-Extraktion mittels Silicapartikeln	278
	5.2.5.2 Polymerase-Kettenreaktion (PCR)	279
	5.2.5.3 PCR-Beispiele	281
	5.2.5.4 Agarosegel-Elektrophorese	288
	5.2.6 3-stufiges Untersuchungsschema Wasservirologie	290
	5.2.7 Störungsquellen	290
	5.2.8 Angabe der Ergebnisse	290
	Literatur	290
	5.3 Cryptosporidien und Giardien	294
	5.3.1 Begriffsbestimmung	294
	5.3.2 Anwendungsbereich	296
	5.3.3 Auswahl einer geeigneten Methode	296
	5.3.4 Prüfung der Sinnhaftigkeit einer Untersuchung auf Cryptosporidien und Giardien	298
	5.3.5 Prinzipielle Verfahrensschritte	298
	5.3.6 Spezielle Geräte und Reagenzien	299
	5.3.6.1 Ermittlung der Wiederfindungsrate	299
	5.3.6.2 Probennahme	299
	5.3.6.3 Filtration	299
	5.3.6.4 Transport	301
	5.3.6.5 Filterelution	301
	5.3.6.6 Eluatkonzentrierung	301
	5.3.6.7 Separation	301
	5.3.6.8 Detektion	302
	5.3.6.9 Reinigung und Desinfektion der Geräte	302
	5.3.7 Untersuchungsgang	302
	5.3.7.1 Ermittlung der Wiederfindungsrate	302
	5.3.7.2 Probengewinnung und Transport	303
	5.3.7.3 Filterelution	305
	5.3.7.4 Eluatkonzentrierung	305
	5.3.7.5 Immunomagnetische Separation	305
	5.3.7.6 FITC-MAB-Markierung und mikroskopischer Nachweis	306
	5.3.7.7 Desinfektion und Reinigung der Geräte	306
	5.3.7.8 Auswertung	307
	5.3.8 Störungsquellen	309
	5.3.9 Angabe der Ergebnisse	311
	5.3.10 Interne Qualitätskontrolle	311
	5.3.11 Externe Qualitätskontrolle	311
	5.3.12 Laborakkreditierung	312
	5.3.13 Alternativ-Verfahren, weitergehende Diagnostik und Methoden-Entwicklungen	312
	Literatur	313
	6 Molekularbiologische Methoden	317
	6.1 Molekularbiologische Verfahren mit praktischer Bedeutung (nach Köster et al. 2003)	318
	6.1.1 Nachweis von Antigenen der gesuchten Mikroorganismen durch spezifische Antikörper	318
	6.1.2 Immunfluoreszenzmikroskopie	318
	6.1.3 Durchflusszytometrie, Fluorescent Activated Cell Sorting (FACS)	319
	6.1.4 Immunomagnetische Separation (IMS)	319
	6.1.5 Molekulare Hybridisierung (MH)	319
	6.1.6 Restriktionsfragmentkartierung, Restriktionsfragmentlängenpolymorphismus (RFLP)	320
	6.1.7 Polymerase-Kettenreaktion (PCR)	320
	6.1.8 DNA Chip Array, Biochips	322
	6.1.9 Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH)	322
	6.2 Praktische Bedeutung	324
	Literatur	324
	7 Spezifische Kriterien	325
	7.1 Untersuchung des Einflusses von Werkstoffen auf die Vermehrung von Mikroorganismen im Trink- und Badewasserbereich in der Praxis und im Laborversuch	325
	7.1.1 Einleitung	325
	7.1.2 Untersuchungen der Besiedlung bzw. Bewuchsbildung in der Praxis	327
	7.1.3 Exposition von Testkörpern und Untersuchung der Bewuchsbildung unter Laborbedingungen	328
	7.1.4 Beurteilung nach dem DVGW Arbeitsblatt W270	330
	7.1.5 Andere Beurteilungsverfahren	332
	7.1.6 Ausblick	333
	Literatur	333
	7.2 Bakterienvermehrungspotential	335
	7.2.1 Begriffsbestimmung	335
	7.2.2 Anwendungsbereich	336
	7.2.3 Geräte und Chemikalien	336
	7.2.3.1 Geräte	336
	7.2.3.2 Chemikalien	337
	7.2.4 Untersuchungsgang	338
	7.2.4.1 Allgemeines	338
	7.2.4.2 Vorbereitung der Wasserproben	338
	7.2.4.3 Herstellung des Inokulums und Animpfung der vorbereiteten Wasserprobe	340
	7.2.4.4 Registrierung der Wachstumskurven	340
	7.2.4.5 Zusätzliche Analysen	341
	7.2.5 Störungsquellen	341
	7.2.6 Auswertung	342
	7.2.7 Angabe der Ergebnisse	342
	Literatur	343
	8 Bewertung	345
	8.1 Trinkwasser	345
	8.1.1 Indikatorbakterien	347
	8.1.2 Koloniezahl	348
	8.1.3 E. coli	349
	8.1.4 Coliforme Bakterien	351
	8.1.5 Enterokokken	352
	8.1.6 Clostridien	353
	8.1.7 Pathogene Bakterien	354
	8.1.8 Salmonellen	355
	8.1.9 Shigellen	356
	8.1.10 Vibrio cholerae, Vibrio vulnificus und weitere Vibrionen	357
	8.1.11 Campylobacter	358
	8.1.12 Yersinien	359
	8.1.13 Pseudomonas aeruginosa	360
	8.1.14 Aeromonaden	361
	8.1.15 Legionellen	362
	8.1.16 Atypische Mykobakterien	363
	8.2 Enterale Viren, Coliphagen	364
	8.3 Cryptosporidium und Giardia	365
	8.4 Mikrobieller Bewuchs/Biofilme	367
	8.5 Qualitätssicherung	367
	8.6 Badewasser	368
	8.6.1 Badegewässer	369
	8.6.2 Kleinbadeteiche	370
	8.6.3 Wasser in Beckenbädern	372
	8.7 Mineral-, Quell- und Tafelwasser	372
	8.8 Rohwasser	373
	Literatur	375
	9 Anhang	379
	Sachregister	387